Čistý olej Saposhnikovia divaricata pro výrobu svíček a mýdla velkoobchodní esenciální olej difuzér nový pro difuzory rákosových hořáků

krátký popis:

 

2.1. Příprava SDE

Oddenky SD byly zakoupeny jako sušená bylina od Hanherb Co. (Guri, Korea). Rostlinné materiály byly taxonomicky potvrzeny Dr. Go-Ya Choi z Korea Institute of Oriental Medicine (KIOM). Vzorek poukázky (číslo 2014 SDE-6) byl uložen v Korejském herbáři standardních rostlinných zdrojů. Sušené oddenky SD (320 g) byly dvakrát extrahovány 70% ethanolem (s 2 hodinovým refluxem) a extrakt byl poté zahuštěn za sníženého tlaku. Odvar byl filtrován, lyofilizován a skladován při 4 °C. Výtěžek vysušeného extraktu ze surových výchozích materiálů byl 48,13 % (hmotn./hmotn.).

 

2.2. Kvantitativní vysokoúčinná kapalinová chromatografie (HPLC) analýza

Chromatografická analýza byla provedena pomocí HPLC systému (Waters Co., Milford, MA, USA) a detektoru fotodiodového pole. Pro HPLC analýzu SDE je primárníO-standard glukosylcimifuginu byl zakoupen od Korea Promotion Institute for Traditional Medicine Industry (Gyeongsan, Korea) asek-O-glukosylhamaudol a 4′-O-β-D-glukosyl-5-O-methylvisamminol byly izolovány v naší laboratoři a identifikovány spektrálními analýzami, především NMR a MS.

Vzorky SDE (0,1 mg) byly rozpuštěny v 70% ethanolu (10 ml). Chromatografická separace byla provedena na koloně XSelect HSS T3 C18 (4,6 × 250 mm, 5μm, Waters Co., Milford, MA, USA). Mobilní fáze sestávala z acetonitrilu (A) a 0,1% kyseliny octové ve vodě (B) při průtoku 1,0 ml/min. Byl použit vícekrokový gradientový program: 5 % A (0 min), 5–20 % A (0–10 min), 20 % A (10–23 min) a 20–65 % A (23–40 min ). Detekční vlnová délka byla snímána při 210–400 nm a zaznamenána při 254 nm. Objem injekce byl 10,0μL. Standardní roztoky pro stanovení tří chromonů byly připraveny v konečné koncentraci 7,781 mg/ml (prim-O-glukosylcimifugin), 31,125 mg/ml (4′-O-β-D-glukosyl-5-O-methylvisamminol) a 31,125 mg/ml (sek-O-glukosylhamaudol) v methanolu a udržován při 4 °C.

2.3. Hodnocení protizánětlivé aktivityIn Vitro

2.3.1. Buněčná kultura a zpracování vzorků

Buňky RAW 264.7 byly získány z American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, VA, USA) a pěstovány v médiu DMEM obsahujícím 1 % antibiotik a 5,5 % FBS. Buňky byly inkubovány ve zvlhčené atmosféře 5% CO2 při 37 °C. Pro stimulaci buněk bylo médium nahrazeno čerstvým médiem DMEM a lipopolysacharidem (LPS, Sigma-Aldrich Chemical Co., St. Louis, MO, USA) při 1μg/ml bylo přidáno v přítomnosti nebo nepřítomnosti SDE (200 nebo 400μg/ml) po dobu dalších 24 hodin.

2.3.2. Stanovení oxidu dusnatého (NO), prostaglandinu E2 (PGE2), faktoru nekrózy nádorů-α(TNF-αa produkce interleukinu-6 (IL-6).

Buňky byly ošetřeny SDE a stimulovány LPS po dobu 24 hodin. Produkce NO byla analyzována měřením dusitanů pomocí Griessova činidla podle předchozí studie [12]. Sekrece zánětlivých cytokinů PGE2, TNF-αa IL-6 byl stanoven pomocí soupravy ELISA (R&D systems) podle pokynů výrobce. Účinky SDE na produkci NO a cytokinů byly stanoveny při 540 nm nebo 450 nm pomocí Wallac EnVision™čtečka mikrodestiček (PerkinElmer).

2.4. Hodnocení aktivity antiosteoartrózyIn vivo

2.4.1. Zvířata

Samci krys Sprague-Dawley (stáří 7 týdnů) byli zakoupeni od Samtako Inc. (Osan, Korea) a umístěni za kontrolovaných podmínek s 12hodinovým cyklem světlo/tma při°C a% vlhkosti. Krysám byla poskytnuta laboratorní strava a vodaad libitum. Všechny experimentální postupy byly provedeny v souladu s pokyny National Institutes of Health (NIH) a schváleny Výborem pro péči o zvířata a použití na univerzitě Daejeon (Daejeon, Korejská republika).

2.4.2. Indukce OA s MIA u potkanů

Zvířata byla randomizována a rozdělena do léčebných skupin před zahájením studie (za skupinu). MIA roztok (3 mg/50μL 0,9% fyziologického roztoku) byl přímo injikován do intraartikulárního prostoru pravého kolena v anestezii vyvolané směsí ketaminu a xylazinu. Potkani byli náhodně rozděleni do čtyř skupin: (1) skupina s fyziologickým roztokem bez injekce MIA, (2) skupina s MIA injekcí, (3) skupina léčená SDE (200 mg/kg) s injekcí MIA a (4 skupina léčená indometacinem (IM-) (2 mg/kg) s injekcí MIA. Krysám byly orálně podávány SDE a IM 1 týden před injekcí MIA po dobu 4 týdnů. Dávkování SDE a IM použité v této studii bylo založeno na dávkování použitém v předchozích studiích [10,13,14].

2.4.3. Měření rozložení hmotnosti zadní tlapky

Po indukci OA byla narušena původní rovnováha ve schopnosti nést váhu zadních tlapek. K vyhodnocení změn v toleranci zatížení byl použit tester nezpůsobilosti (Linton instrumentation, Norfolk, UK). Krysy byly opatrně umístěny do měřicí komory. Síla nesení hmotnosti vyvíjená zadní končetinou byla zprůměrována během 3 sekund. Poměr rozložení hmotnosti byl vypočten podle následující rovnice: [hmotnost na pravé zadní končetině/(hmotnost na pravé zadní končetině + váha na levé zadní končetině)] × 100 [15].

2.4.4. Měření hladin sérových cytokinů

Vzorky krve byly centrifugovány při 1500 g po dobu 10 minut při 4 °C; poté bylo sérum odebráno a skladováno při -70 °C až do použití. Hladiny IL-1β, IL-6, TNF-αa PGE2 v séru byly měřeny pomocí souprav ELISA od R&D Systems (Minneapolis, MN, USA) podle pokynů výrobce.

2.4.5. Kvantitativní RT-PCR analýza v reálném čase

Celková RNA byla extrahována z tkáně kolenního kloubu pomocí činidla TRI reagent® (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA), reverzně transkribována do cDNA a amplifikována pomocí PCR pomocí soupravy TM One Step RT PCR s SYBR green (Applied Biosystems , Grand Island, NY, USA). Kvantitativní PCR v reálném čase byla provedena pomocí systému Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR (Applied Biosystems, Grand Island, NY, USA). Sekvence primerů a sekvence sondy jsou uvedeny v tabulce1. Alikvoty vzorků cDNA a stejné množství GAPDH cDNA byly amplifikovány pomocí TaqMan® Universal PCR master směsi obsahující DNA polymerázu podle pokynů výrobce (Applied Biosystems, Foster, CA, USA). Podmínky PCR byly 2 minuty při 50 °C, 10 minut při 94 °C, 15 s při 95 °C a 1 minuta při 60 °C po 40 cyklů. Koncentrace cílového genu byla stanovena pomocí srovnávací metody Ct (prahové číslo cyklu v křížovém bodě mezi grafem amplifikace a prahem) podle pokynů výrobce.

Cena FOB:0,5–9 999 USD / kus

Minimální množství objednávky:100 kusů/kusů

Schopnost zásobování:10 000 kusů/kusů za měsíc