Čistý olej Saposhnikovia divaricata pro výrobu svíček a mýdla, velkoobchodní difuzér, nový esenciální olej pro difuzéry do rákosových kahanů

krátký popis:

 

2.1. Příprava SDE

Oddenky SD byly zakoupeny jako sušená bylina od společnosti Hanherb Co. (Guri, Korea). Rostlinný materiál byl taxonomicky potvrzen Dr. Go-Ya Choiem z Korejského institutu orientální medicíny (KIOM). Vzorek s poukázkou (číslo 2014 SDE-6) byl uložen v korejském herbáři Standard Herbal Resources. Sušené oddenky SD (320 g) byly dvakrát extrahovány 70% ethanolem (s 2hodinovým refluxem) a extrakt byl poté zahuštěn za sníženého tlaku. Odvar byl filtrován, lyofilizován a skladován při 4 °C. Výtěžek sušeného extraktu ze surových výchozích materiálů byl 48,13 % (hmotnostních).

 

2.2. Kvantitativní analýza vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií (HPLC)

Chromatografická analýza byla provedena pomocí HPLC systému (Waters Co., Milford, MA, USA) a detektoru s fotodiodovým polem. Pro HPLC analýzu SDE byl použit primární...O-glukosylcimifuginový standard byl zakoupen od Korejského institutu pro podporu tradiční medicíny (Gyeongsan, Korea) asec-O-glukosylhamaudol a 4′-O-β-D-glukosyl-5-OV naší laboratoři byly izolovány a identifikovány spektrálními analýzami, primárně NMR ​​a MS.

Vzorky SDE (0,1 mg) byly rozpuštěny v 70% ethanolu (10 ml). Chromatografická separace byla provedena na koloně XSelect HSS T3 C18 (4,6 × 250 mm, 5μm, Waters Co., Milford, MA, USA). Mobilní fáze se skládala z acetonitrilu (A) a 0,1% kyseliny octové ve vodě (B) při průtoku 1,0 ml/min. Byl použit vícestupňový gradientní program takto: 5 % A (0 min), 5–20 % A (0–10 min), 20 % A (10–23 min) a 20–65 % A (23–40 min). Detekční vlnová délka byla skenována při 210–400 nm a zaznamenávána při 254 nm. Vstřikovaný objem byl 10,0μL. Standardní roztoky pro stanovení tří chromonů byly připraveny s konečnou koncentrací 7,781 mg/ml (primárněO-glukosylcimifugin), 31,125 mg/ml (4′-O-β-D-glukosyl-5-O-methylvisaminol) a 31,125 mg/ml (sec-O-glukosylhamaudol) v methanolu a uchováván při 4 °C.

2.3. Hodnocení protizánětlivé aktivityIn vitro

2.3.1. Buněčná kultura a ošetření vzorků

Buňky RAW 264.7 byly získány z American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, VA, USA) a pěstovány v médiu DMEM obsahujícím 1 % antibiotik a 5,5 % FBS. Buňky byly inkubovány ve zvlhčené atmosféře s 5 % CO2 při teplotě 37 °C. Pro stimulaci buněk bylo médium nahrazeno čerstvým médiem DMEM a lipopolysacharidem (LPS, Sigma-Aldrich Chemical Co., St. Louis, MO, USA) při 1 °C.μg/ml bylo přidáno v přítomnosti nebo nepřítomnosti SDE (200 nebo 400μg/ml) po dobu dalších 24 hodin.

2.3.2 Stanovení oxidu dusnatého (NO), prostaglandinu E2 (PGE2), tumor nekrotizujícího faktoruα(TNF-α) a produkce interleukinu-6 (IL-6)

Buňky byly ošetřeny SDE a stimulovány LPS po dobu 24 hodin. Produkce NO byla analyzována měřením dusitanů pomocí Griessova činidla dle předchozí studie [12]. Sekrece zánětlivých cytokinů PGE2, TNF-αa IL-6 byl stanoven pomocí ELISA soupravy (R&D systems) dle pokynů výrobce. Účinky SDE na produkci NO a cytokinů byly stanoveny při 540 nm nebo 450 nm za použití Wallac EnVision.™čtečka mikrodestiček (PerkinElmer).

2.4. Hodnocení antiosteoartritidové aktivityIn vivo

2.4.1. Zvířata

Samci potkanů ​​kmene Sprague-Dawley (7 týdnů starí) byli zakoupeni od společnosti Samtako Inc. (Osan, Korea) a chováni za kontrolovaných podmínek s 12hodinovým cyklem světlo/tma při°C a% vlhkosti. Potkanům byla poskytnuta laboratorní strava a vodaad libitumVšechny experimentální postupy byly provedeny v souladu s pokyny Národních institutů zdraví (NIH) a schváleny Komisí pro péči o zvířata a jejich používání Univerzity v Daejeonu (Daejeon, Korejská republika).

2.4.2. Indukce osteoartrózy s MIA u potkanů

Zvířata byla před zahájením studie randomizována a přidělena do léčebných skupin (na skupinu). Roztok MIA (3 mg/50μ1 l 0,9% fyziologického roztoku) byl přímo injikován do intraartikulárního prostoru pravého kolena v anestezii vyvolané směsí ketaminu a xylazinu. Krysy byly náhodně rozděleny do čtyř skupin: (1) skupina s fyziologickým roztokem bez injekce MIA, (2) skupina s MIA s injekcí MIA, (3) skupina léčená SDE (200 mg/kg) s injekcí MIA a (4) skupina léčená indomethacinem (IM) (2 mg/kg) s injekcí MIA. Krysám byl SDE a IM podáván perorálně 1 týden před injekcí MIA po dobu 4 týdnů. Dávkování SDE a IM použité v této studii bylo založeno na dávkách použitých v předchozích studiích [10,13,14].

2.4.3. Měření rozložení hmotnosti zadních tlapek

Po indukci osteoartrózy (OA) byla původní rovnováha v nosnosti zadních tlapek narušena. K vyhodnocení změn v toleranci nosnosti byl použit tester inkapacitance (Linton Instrumentation, Norfolk, Spojené království). Krysy byly opatrně umístěny do měřicí komory. Síla nosnosti vyvíjená zadní končetinou byla zprůměrována po dobu 3 sekund. Poměr rozložení hmotnosti byl vypočítán pomocí následující rovnice: [hmotnost na pravé zadní končetině / (hmotnost na pravé zadní končetině + hmotnost na levé zadní končetině)] × 100 [15].

2.4.4. Měření hladin cytokinů v séru

Vzorky krve byly centrifugovány při 1 500 g po dobu 10 minut při 4 °C; poté bylo sérum odebráno a skladováno při -70 °C do použití. Hladiny IL-1β, IL-6, TNF-α, a PGE2 v séru byly měřeny pomocí ELISA sad od společnosti R&D Systems (Minneapolis, MN, USA) podle pokynů výrobce.

2.4.5. Kvantitativní RT-PCR analýza v reálném čase

Celková RNA byla extrahována z tkáně kolenního kloubu za použití reagencie TRI® (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA), reverzně transkribována do cDNA a amplifikována PCR za použití soupravy TM One Step RT PCR s barvou SYBR green (Applied Biosystems, Grand Island, NY, USA). Kvantitativní PCR v reálném čase byla provedena za použití systému Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR (Applied Biosystems, Grand Island, NY, USA). Sekvence primerů a sekvence sondy jsou uvedeny v tabulce.1Alikvotní podíly vzorků cDNA a stejné množství cDNA GAPDH byly amplifikovány pomocí TaqMan® Universal PCR master mixu obsahujícího DNA polymerázu dle pokynů výrobce (Applied Biosystems, Foster, CA, USA). Podmínky PCR byly 2 minuty při 50 °C, 10 minut při 94 °C, 15 s při 95 °C a 1 minuta při 60 °C po dobu 40 cyklů. Koncentrace cílového genu byla stanovena pomocí metody komparativního Ct (prahový počet cyklů v bodě průsečíku mezi amplifikačním grafem a prahem) dle pokynů výrobce.

Cena FOB:0,5–9 999 USD/kus

Minimální množství objednávky:100 kusů

Schopnost dodávky:10 000 kusů/kusů za měsíc